前言

宮頸癌(cervical cancer)是最常見的婦科惡性腫瘤之一，且患病人群有年輕化的趨勢。目前認(rèn)為宮頸癌發(fā)病的基本相關(guān)因素為人類乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染。采用人或動物宮頸癌腫瘤細(xì)胞株，可以構(gòu)建人或動物宮頸癌移植瘤模型，也可采用HPV等病毒誘發(fā)宮頸癌動物模型。

部分造模方法

使用動物：小鼠

【造模機(jī)制】：

HPV目前已鑒定出的超過200多種亞型，約40種亞型能感染生殖道，以性接觸方式傳播。HPV感染和宮頸癌的發(fā)生具有直接關(guān)系，高危型HPV可以與宿主染色體整合，是宮頸早期癌變／癌前病變最直接的始動因素。HPV16型、18型E6和E7基因已被證實(shí)是轉(zhuǎn)化基因，其編碼的E6、E7蛋白在宮頸癌細(xì)胞系和癌組織細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)，并在維持轉(zhuǎn)化組織惡性表型的過程中起著至關(guān)重要的作用。HPV病毒的E6、E7蛋白可與p53、Rb相互作用，其中E6蛋白通過細(xì)胞泛素連接酶E6AP與p53結(jié)合，導(dǎo)致抑癌基因p53降解，破壞了p53介導(dǎo)的P14-MDM2-p53途徑，失去正常調(diào)控引起細(xì)胞無限增殖；E7蛋白競爭優(yōu)先與pRb結(jié)合，使pRb與E2F解離，游離E2F增多，導(dǎo)致P16-cyclinD­CDK4/6-pRb-E2F途徑調(diào)控失調(diào)，啟動G1-S期進(jìn)展，引起細(xì)胞無限增殖。

【造模方法】：

從人宮頸癌組織中提取HPV16E6/7基因，以pCEP4載體為骨架，用人巨細(xì)胞病毒啟動子啟動下游基因表達(dá)。將經(jīng)線性化的包含人巨細(xì) 胞病毒啟動子、HPV16E6/7目的基因、SV40PolyA尾的DNA部分，通過將外源基因顯微注射到供體小鼠受精卵的雄原核中，再植入假孕受體鼠的輸卵管中，獲得穩(wěn)定遺傳的HPV16E6/7轉(zhuǎn)基因鼠。

HPV16轉(zhuǎn)基因鼠的建立始于20世紀(jì)90年代，1994年Arbeit等人用K14啟動子建立了HPV16進(jìn)展型鱗狀上皮腫瘤轉(zhuǎn)基因鼠，同年Sasagawa等人建立了HPV16 E6/7宮頸、陰道不典型增生轉(zhuǎn)基因鼠，1996年Herber等人用HPV16E7癌基因建立了鱗狀上皮增生和癌的轉(zhuǎn)基因鼠，2000年Shiyu Song等人用IHIN啟動子建立了表達(dá)HPV16  E6、E7蛋白的轉(zhuǎn)基因鼠等。

【模型特點(diǎn)】：

該模型鼠大約4~6個月開始出現(xiàn)皮膚不典型增生，18個月左右?guī)缀跛行∈笏烙趯m頸癌、皮膚癌、眼癌、橫紋肌肉瘤等惡性腫瘤。

【模型評估和應(yīng)用】：

HPV轉(zhuǎn)基因鼠主要采用皮膚特異性啟動子啟動下游基因表達(dá)，所以得到的腫瘤模型以鱗狀上皮腫瘤為主；若采用的CMV啟動子為通用啟動子，在多數(shù)細(xì)胞、組織中都能表現(xiàn)出很強(qiáng)的活性，會得到多種組織起源的腫瘤。建立的HPV轉(zhuǎn)基因模型鼠存活時間較長，能夠有足夠的時間得到足夠數(shù)量的小鼠以對其進(jìn)行深入的致癌機(jī)制研究，同時也利于模型鼠的推廣和應(yīng)用。利用顯微注射技術(shù)建立HPV16E6/7轉(zhuǎn)基因小鼠病理模型，將為進(jìn)一步研究HPV的致癌性及HPV與機(jī)體的相互作用關(guān)系，為HPV感染相關(guān)疾病的研究、皮膚癌和宮頸癌的治療以及HPV疫苗評價(jià)提供動物模型系統(tǒng)，在預(yù)防我國HPV感染性疾病方面將會有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

隨著轉(zhuǎn)基因、基因敲除等技術(shù)在實(shí)驗(yàn)動物模型中的廣泛應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)動物的品種、品系及具有人類疾病特征的動物模型種類也快速增長，建立理想的宮頸癌動物模型，對進(jìn)一步了解宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，從而對其有效預(yù)防和治療將起關(guān)鍵作用。

參考文獻(xiàn)：

1.龍曉燕，溫敏．轉(zhuǎn)基因動物在人類疾病動物模型中的應(yīng)用．云南中醫(yī)中藥雜志，2007,28 (6):43-45

2.陳柯，陳崢崢，胡聞，等．SCID鼠人宮頸癌組織模型的建立及其生物學(xué)特性初探．安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005, 40(6):541-543

3.徐立新，葉云飛，馬戎，等．裸小鼠人宮頸癌組織模型的建立及其生物學(xué)特性初探．腫瘤防治研究，20J0,37 (9): 1017-1021

4.高慧．人乳頭瘤病毒16E6/7轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及HPV16DNA疫苗的研究．揚(yáng)州大學(xué)研究生學(xué)位論文，2005

5.黃正芳．HPV16E6/7轉(zhuǎn)基因動物模型的建立．揚(yáng)州大 學(xué)研究生學(xué)位論文，2005

6.韓鳳娟，陳惠錚，于燕，等．二甲基苯蒽誘發(fā)小鼠宮頸上皮內(nèi)瘤變動物模型的初步觀察．中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008, 18 (14): 1995-1996

7.魯?shù)裸y，鄧培．巴豆油對人巨細(xì)胞病搖誘發(fā)小鼠宮頸癌的促進(jìn)作用．湖北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1997,18(1): 1-4

8.潘巍?。巳轭^瘤病毒16(HPV-16)E6/E7基因原核表達(dá)、不同啟動子的載體構(gòu)建及其動物模型的研究．重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文，2006

9.Ledoux D, Hamma-Kourbali Y, Di Benedetto M, el al. A new dimethyl ester bisphosphonale inhibits angiogenesis and growth of human epidermoid carcinoma xenograft in nude mice. Anticancer Drugs,2006, 17 (4):479-485