前言
年齡相關性黃斑變性(age related macular degeneralion, AMD)是65歲以上老年人致盲的主要原因。AMD分為無新生血管生成的干性以及新生血管生成的濕性表現。濕性AMD患者發(fā)生CNV是導致視力喪失的最常見因素。本章將介紹CNV的造模方法。
部分造模方法
使用動物：小鼠
【造模機制】：
氧誘導視網膜新生血管，病理性的新生血管形成伴有從視網膜爬行到玻璃體異常的血管芽。這種新生血管芽導致很多并發(fā)癥，如血漿滲漏、出血，并在某些情況下，引起牽拉性視網膜脫離或致盲。在高氧暴露的第一個階段（出生后7~12天），視網膜血管收縮以調節(jié)視網膜中的氧分壓，同時位于中心視網膜區(qū)的不成熟毛細血管退化導致中心區(qū)血管閉塞。由于高氧暴露和生理性的垂直血管芽從淺層毛細血管網向深層生長的時相重疊，從而導致視網膜深層毛細血管網形成明顯的延遲。第二個階段，在出生后12天回到正?？諝猸h(huán)境中之后，血管閉塞區(qū)開始缺氧，小鼠的視網膜血管閉塞區(qū)無血管和病理性新生血管的生成。
【造模方法】：
將1周小鼠與它們的母鼠置于氧濃度為75％±2％的動物氧艙中喂養(yǎng)5天。氧艙內氧流量控制在0.5~0.6L/min，排氣流量大小可自行調節(jié)，保證氧氣循環(huán)流動，而且濃度穩(wěn)定在75％左右，等到氧艙中氧氣濃度穩(wěn)定后，每隔4小時用數字測氧儀監(jiān)測氧艙內氧氣濃度，保證氣體的流入和流出平衡。氧艙內壓力一定要保持為常壓或者接近常壓。而后再在正?？諝鈼l件下喂養(yǎng)5天。
【模型特點】：
經過5天的氧誘導，并在正?？諝鈼l件下飼養(yǎng)5天后，C57BL/6J小鼠出現了明顯的血管攣縮或者擴張、迂曲、分布稀疏，部分血管出現栓塞，可見明顯的無灌注區(qū)，主要集中于視網膜的中央部，周邊部有新生血管或散在的出血存在（圖12-4)。出生后17天，氧誘導小鼠有大量的血管內皮細胞突破視網膜內界膜，有的甚至形成血管網到達玻璃體，而在出生后17天的正常小鼠的視網膜組織切片上，幾乎未觀察到突破內界膜的血管內皮細胞核。氧誘導小鼠內層視網膜的抗VEGF免疫組織化學染色增強。
圖12-4 氧誘導小鼠視網膜新生血管
【模型評估和應用】：
氧誘導視網膜新生血管可模擬早產兒過早暴露于正常氧分壓環(huán)境，引起早產兒視網膜疾病的病例，可為研究早產兒視網膜疾病的診治提供實驗基礎。造模過程中，為保證小鼠出艙后的存活率，可每天打開大氣體流入口和流出口充分換氣讓實驗動物代謝產生的有毒有害氣體充分排出，也為了使水蒸氣能夠排出，而后再重新調節(jié)氧流量，使其保持在實驗濃度條件下即可。特別是夏季，要經常通風。實驗期間若有母鼠死亡，則開艙用備用母鼠代替哺乳，可用替代母鼠的墊料充分覆蓋和涂抹仔鼠，防止食仔鼠或者不哺乳現象的發(fā)生。
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