前言

年齡相關(guān)性黃斑變性(age related macular dege­neralion, AMD)是65歲以上老年人致盲的主要原因。AMD分為無新生血管生成的干性以及新生血管生成的濕性表現(xiàn)。濕性AMD患者發(fā)生CNV是導(dǎo)致視力喪失的最常見因素。本章將介紹CNV的造模方法。

部分造模方法

使用動物：大鼠

【造模機(jī)制】：

目前認(rèn)為，強(qiáng)光或者持續(xù)光暴露導(dǎo)致的視網(wǎng)膜損傷受到種屬、區(qū)域、飲食、光飼養(yǎng)歷史的預(yù)處理和基因背景的影響。視網(wǎng)膜氧化光損傷的機(jī)制之一，視網(wǎng)膜氧化損傷和感受器細(xì)胞損傷反應(yīng)是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、酶活性的變化和激活、細(xì)胞內(nèi)金屬離子、多種凋亡途徑等綜合作用的結(jié)果，同時可能存在種屬依賴性。

【造模方法】：

在光照方式和強(qiáng)度選擇上，Esfandiari等證實明暗交替飼養(yǎng)更符合生物的日常生存狀態(tài)，并可降低大鼠視網(wǎng)膜損傷的閾值，造成的損傷更為嚴(yán)重。選擇8~9周的成年大鼠，選擇將大鼠置于明暗交替環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，建模前完全暗適12小時，用(5000±300) lux強(qiáng)度光照射3小時，可導(dǎo)致大鼠視網(wǎng)膜重度損傷。根據(jù)大鼠的活動特性，造模時間選為晚19 : 00至次日早7: 00。

【模型特點】：

給予1~3小時光照強(qiáng)度(5000±300) lux的光輻照，均可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜電生理功能的降低。不同時間光輻照后，ERG各測量指標(biāo)的變化與輻照時間長短有關(guān)，輻照時間越長，改變越明顯，損傷越重，實驗各組間比較均有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。正常對照組大鼠視網(wǎng)膜組織切片結(jié)構(gòu)層次清晰，光感受器的外節(jié)盤膜排列整齊、規(guī)則，內(nèi)核層和外核層排列緊密，染色均勻。強(qiáng)光輻照對視網(wǎng)膜有明顯的損傷作用，損傷部位主要位于大鼠顳上象限區(qū)域，光損傷是一個級別反應(yīng)，不同區(qū)域損傷程度差異很大。光輻照后不同時間點，視網(wǎng)膜ONL各區(qū)域厚度呈現(xiàn)明顯不同（圖12-5/文末彩圖12-5)。

圖12-5 不同光照時間下的視網(wǎng)膜損傷模型

注：A．不同光照時間下視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)對比(×400,Scale bar =50µm); B．不同光照時間下不同區(qū)域視網(wǎng)膜外網(wǎng)層厚度變化(REP：色素上皮層；OS：光感受器外節(jié)；IS：光感受器內(nèi)節(jié)；ONL：外核層；OPL：外叢狀層；INL：內(nèi)核層； IPL：內(nèi)叢狀層；GCL：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層）

【模型評估和應(yīng)用】：

光損傷視網(wǎng)膜疾病動物模型，因為各種造模設(shè)備的不同，產(chǎn)生的效果不盡相同。實驗中要保證實驗動物的視網(wǎng)膜能充分地被光照射；在光強(qiáng)的選擇上，要以實驗?zāi)康臑榛A(chǔ)，選擇合適的光強(qiáng)；在造模動物的年齡上，要注意選擇成年大鼠，Joly等報道給予幼年(2周或者4周）和成年(8周）大鼠同等的光照強(qiáng)度，幼鼠遭受的光照損傷較輕，但這種優(yōu)勢在4周后逐漸消失；并且造模環(huán)境的溫度也是影響實驗結(jié)果的重要因素，本實驗室發(fā)現(xiàn)在高溫時會加重視網(wǎng)膜損傷。

參考文獻(xiàn)：

1.王應(yīng)利，惠延年．糖尿病視網(wǎng)膜病變動物模型選擇的注意事項．中華眼科雜志，2012,48 (7):587-590

2.Baehr W, Frederick JM. Naturally occurring animal models with outer retina phenotypes. Vis Res,2009,49: 2636-2652

3.Bourne MC, Campbell DA, Tansley K. Hereditary degeneration of rat retina. Br J Ophthalmol, 1938,22(10): 613-623

4.Bundey S,Crews SJ. A study of retinitis pigrnentosa in the city of Birmingham-I. J Med Genet, 1984,21(6):417-420

5.Chang B, Heckenlively IB,Bayley PR.et a.I. The nob2 mouse, a null mutation in Cacnalf: anatomical and functional abnormalities in the outer retina and their consequences on ganglion cell visual responses. Vis Neurosci, 2006, 23 (1): 11-24

6.Criswell MH,Ciulla TA,Hill TE,et al. The squirrelmonkey: characterization of a new-world primate model of xperimental choroidal neovascularizalion and comparison with the macaque. Invest Ophthalmol Vis Sci,2004, 45 (2): 625-634

7.Gu Y, Wang L,Zhou J,et al. A naturally-occurring mutation in CacnaIf in a rat model of congenital stationary night blindness. Mo! Vis,2008, 14(1):20-28

8.Lue CL. Rod cell activity in retinal degenerative rats. J Formos Med Assoc, 1994,93(7):605-610

9.Pinkert CA. Transgenic animal technology. New York: Academic Press, 1994

10.Sato H, Suzuki T, Ikeda K, et aL A monogenic dominant mutation in Rom l generated by N-ethyl-N-nitrosourea mutagenesis causes retinal degeneration in mice. Mol Vis,2010, 16:378-391

11.Williams TP, Howell WL. Action spectrum of retinal light-damage in albino rats. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1983, 24 (3):285-287

12.Won J, Shi LY, Hicks W, et al. Mouse model resources for vision research. J Ophthalmol,2011,2011:391384

13.Xie B,Nakanishi S,Guo Q,et al. A novel middle­wavelength opsin (M-opsin) null-mutation in the retinal cone dysfunction ral. Exp Eye Res,2010,91(1):26-33