前言

角膜疾病(cornea disease)對視力的危害性很大，各種角膜疾病引起角膜的混濁是致盲的主要原因之一。目前我國眾多致盲的疾病中，角膜疾病僅次于白內(nèi)障位居第二。角膜疾病主要包括角膜的炎癥、外傷、先天性異常、變性、營養(yǎng)不良及腫瘤等。其中感染性角膜炎在臨床上更為多見，具有重要意義。加強角膜疾病的防治研究已成為減少因角膜疾病致盲的重要措施。

結(jié)膜是一層半透明的黏膜，由眼瞼緣間部開始覆蓋于眼瞼后和眼球前，可分為上皮層和黏膜下基質(zhì)層。結(jié)膜上皮毗鄰于角膜上皮，因此角膜、結(jié)膜疾病容易相互影響。角膜的大部分表面暴露于外界，與多種致病因素相接觸。當眼表的特異性和非特異性防御機制減退或外界致病因素增強時，將引起結(jié)膜組織的疾病。其中結(jié)膜炎是眼科最常見的疾病之一。

根據(jù)疾病類型，常見角膜、結(jié)膜疾病動物模型包括角結(jié)膜炎模型、角膜損傷模型、角膜新生血管模型及干眼病模型等。

根據(jù)病因的不同，角結(jié)膜炎(kerato conjunctivitis) 包括微生物性和非微生物性兩大類。其中微生物性角結(jié)膜炎是最常見的，包括細菌性、病毒性、真菌性及偶見的寄生蟲性。非微生物性角結(jié)膜炎包括物理性因素（紫外線、粉塵等）、化學性因素（藥品、酸堿、有毒氣體等）和免疫性因素引起的角結(jié)膜炎癥反應(yīng)。角結(jié)膜炎引起的損傷不僅與病原體的感染或其他病因的刺激有關(guān)，同時也與宿主的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。

部分造模方法

使用動物：家兔

【造模機制】：

角膜實質(zhì)層占角膜厚度90％，由100~200層排列規(guī)則的膠原纖維組成，角膜板層纖維之間有少量的角膜固有細胞。當角膜損傷和炎癥時，可誘使這些細胞演變?yōu)槌衫w維細胞，參與損傷部位的修復(fù)。角膜無血管，其營養(yǎng)來源于房水、淚膜和角膜緣毛細血管。細菌性角膜炎(bacterial keratitis)炎癥期損傷部位的上皮層及實質(zhì)層細胞亦可釋放出蛋白水解酶，導致潰瘍變深和增大。眼結(jié)膜和淚腺也參與炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)結(jié)膜紅腫充血，淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞增多，淚液可沖洗結(jié)膜囊和角膜表面。淚液中含有某些抗菌性溶菌酶、免疫球蛋白具有殺菌作用。但機體修復(fù)快慢與角膜損傷深淺、細菌毒力強弱、感染細菌量多少有關(guān)。銅綠假單胞菌是目前眼科致病性較強的細菌。由于該菌產(chǎn)生多種溶解酶可引起局部組織的降解，導致機體對細菌產(chǎn)生炎性反應(yīng)，表現(xiàn)角膜組織破壞甚至穿孔。

【造模方法】：

選用健康家兔，體重2.0kg左右，雌雄不限。造模前進行外眼檢查，無異常者用于造模。造模前先進行細菌接種液的制備，將4℃冰箱保存的銅綠假單胞菌接種到普通瓊脂培養(yǎng)基上，36℃環(huán)境培養(yǎng)24~48小時，用鉑金耳環(huán)刮下菌落，用生理鹽水配成2×10⁹/ml濃度（光電比濁儀測定濃度）。造模時，用丁卡因?qū)彝醚圻M行局部輕度麻醉，用環(huán)鉆壓迫角膜無反應(yīng)，先后用7mm和4mm直徑角膜環(huán)鉆輕輕按壓角膜順時針旋轉(zhuǎn)，造成環(huán)形創(chuàng)傷。拉開眼臉成杯形，用1ml注射器吸取2×10⁹/ml菌液滴于兔眼0.1ml/眼，感染單眼。24小時后觀察眼部癥狀并進行評分，連續(xù)觀察7天。

0級：眼明亮無分泌物；0.5級：無分泌物覆蓋，眼稍有紅腫；1級：分泌物覆蓋小于6mm;2級：分泌物覆蓋充滿6mm;3級：分泌物覆蓋大于6mm。

感染后第1、3、5天用無菌生理鹽水棉簽取感染眼和對照眼分泌物，分別放入4ml生理鹽水中混勻（待檢液）。吸取1ml待檢液加入無菌培養(yǎng)皿(90mm直徑），將加熱融化再冷卻至45°C左右的營養(yǎng)瓊脂倒入培養(yǎng)皿15ml，輕輕順時針搖勻，待冷凝后置36℃培養(yǎng)箱24小時，判斷細菌陰陽性。

【模型特點】：

接種24~48小時后，患眼出現(xiàn)大量微黃色分泌物，眼結(jié)膜嚴重充血，角膜混濁，雙眼緊閉，膿性分泌物使眼臉粘連，輕輕拉開兔眼分泌物覆蓋全角膜，幾乎無法窺見虹膜瞳孔。第5天除少數(shù)眼評分為2.0級外，多數(shù)可達3.0級。細菌培養(yǎng)結(jié)果：接種后第1、3、5天分泌物培養(yǎng)均呈陽性。角膜病理切片顯示：角膜高度水腫、混濁，前1/3基質(zhì)可見大量中性粒細胞、淋巴細胞、成纖維細胞和壞死組織。上皮下傷口潰瘍未愈合。角膜基質(zhì)中可見新生血管，部分切片可見角膜穿孔，前房積膿。虹膜血管擴張、充血并有大量炎細胞浸潤。

【模型的評估和應(yīng)用】：

本方法采用角膜環(huán)鉆造成角膜損傷其操作簡單，便于掌握。但造模者手法 的輕重差異，會造成角膜損傷深淺不一致，在實驗分組時應(yīng)按評分標準均勻分組，使每組動物模型炎癥程度無明顯差異。本法建立的動物模型適用臨床抗菌藥物篩選。

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